Novel Coronavirus (SARS-CoV-2) កញ្ចប់ PCR ច្រើនម៉ោងពិតប្រាកដ
ឧបករណ៍ PCR ដែលត្រៀមរួចជាស្រេចដែលមានភាពរសើបខ្លាំងនេះមាននៅក្នុងទម្រង់ lyophilized (ដំណើរការស្ងួតត្រជាក់) សម្រាប់ការផ្ទុករយៈពេលវែង។ឧបករណ៍នេះអាចដឹកជញ្ជូន និងរក្សាទុកនៅសីតុណ្ហភាពបន្ទប់ និងមានស្ថេរភាពរយៈពេលមួយឆ្នាំ។បំពង់នីមួយៗនៃ premix មានផ្ទុកនូវសារធាតុប្រតិកម្មទាំងអស់ដែលត្រូវការសម្រាប់ការពង្រីក PCR រួមទាំង Reverse-transcriptase, Taq polymerase, primers, probes និង dNTPs substrates។វាគ្រាន់តែត្រូវការបន្ថែមទឹកចម្រោះ 13ul និង 5ul ចំរាញ់ RNA គំរូ បន្ទាប់មកវាអាចត្រូវបានដំណើរការ និងពង្រីកនៅលើឧបករណ៍ PCR ។
ម៉ាស៊ីន qPCR គួរតែជួបតម្រូវការខាងក្រោម៖
1. សម 8 បន្ទះ PCR បំពង់ បរិមាណ 0.2 មីលីលីត្រ
2. មានបណ្តាញរាវរកច្រើនជាងបួន៖
ឆានែល | ការរំភើបចិត្ត (nm) | ការបំភាយ (nm) | ថ្នាំជ្រលក់មុនកំណត់ |
1. | ៤៧០ | ៥២៥ | FAM, SYBR Green I |
2 | ៥២៣ | ៥៦៤ | VIC, HEX, TET, JOE |
3. | ៥៧១ | ៦២១ | ROX, TEXAS-RED |
4 | ៦៣០ | ៦៧០ | CY5 |
PCR-វេទិកា៖
ប្រព័ន្ធ PCR 7500Real-Time, Biorad CF96, iCycler iQ™ Real-Time PCR Detection System, Stratagene Mx3000P, Mx3005P
ភាពលំបាកនៃការដឹកជញ្ជូនខ្សែសង្វាក់ត្រជាក់នៃសារធាតុរាវរកអាស៊ីតនុយក្លេអ៊ីកថ្មី Coronavirus
នៅពេលដែលភ្នាក់ងាររកឃើញអាស៊ីតនុយក្លេអ៊ីកធម្មតាត្រូវបានដឹកជញ្ជូនក្នុងចម្ងាយឆ្ងាយ ការផ្ទុក និងការដឹកជញ្ជូនខ្សែសង្វាក់ត្រជាក់ (-20±5) ℃ គឺត្រូវបានទាមទារដើម្បីធានាថាជីវសកម្មនៃអង់ស៊ីមនៅក្នុងសារធាតុ reagents នៅតែសកម្ម។ដើម្បីប្រាកដថាសីតុណ្ហភាពឡើងដល់កម្រិតស្តង់ដារ ទឹកកកស្ងួតជាច្រើនគីឡូក្រាមត្រូវការជាចាំបាច់សម្រាប់ប្រអប់នីមួយៗនៃសារធាតុធ្វើតេស្តអាស៊ីតនុយក្លេអ៊ីក ទោះបីជាតិចជាង 50 ក្រាមក៏ដោយ ប៉ុន្តែវាអាចមានរយៈពេលត្រឹមតែ 2 ឬ 3 ថ្ងៃប៉ុណ្ណោះ។តាមទស្សនៈនៃការអនុវត្តឧស្សាហកម្ម ទម្ងន់ជាក់ស្តែងនៃសារធាតុដែលចេញដោយអ្នកផលិតគឺតិចជាង 10% (ឬតិចជាងតម្លៃនេះ) នៃធុង។ទម្ងន់ភាគច្រើនបានមកពីទឹកកកស្ងួត ថង់ទឹកកក និងប្រអប់ស្នោ ដូច្នេះហើយតម្លៃនៃការដឹកជញ្ជូនគឺខ្ពស់ណាស់។
នៅខែមីនា ឆ្នាំ 2020 កូវីដ-19 បានចាប់ផ្តើមផ្ទុះឡើងជាទ្រង់ទ្រាយធំនៅក្រៅប្រទេស ហើយតម្រូវការសម្រាប់សារធាតុរាវរកអាស៊ីតនុយក្លេអ៊ីក Novel Coronavirus បានកើនឡើងយ៉ាងខ្លាំង។ទោះបីជាមានការចំណាយខ្ពស់ក្នុងការនាំចេញសារធាតុប្រតិកម្មនៅក្នុងខ្សែសង្វាក់ត្រជាក់ក៏ដោយ ក្រុមហ៊ុនផលិតភាគច្រើននៅតែអាចទទួលយកបានដោយសារតែបរិមាណច្រើន និងប្រាក់ចំណេញខ្ពស់។
ទោះបីជាយ៉ាងណាក៏ដោយ ជាមួយនឹងការធ្វើឱ្យប្រសើរឡើងនូវគោលនយោបាយនាំចេញជាតិសម្រាប់ផលិតផលប្រឆាំងនឹងជំងឺរាតត្បាត ក៏ដូចជាការធ្វើឱ្យប្រសើរឡើងនូវការគ្រប់គ្រងជាតិលើលំហូរនៃមនុស្ស និងភស្តុភារ មានការពន្យារពេល និងភាពមិនច្បាស់លាស់នៅក្នុងពេលវេលាដឹកជញ្ជូននៃសារធាតុប្រតិកម្ម ដែលបណ្តាលឱ្យមានបញ្ហាផលិតផលលេចធ្លោដែលបង្កឡើង។ ដោយការដឹកជញ្ជូន។ការពង្រីកពេលវេលាដឹកជញ្ជូន (ពេលវេលាដឹកជញ្ជូនប្រហែលកន្លះខែគឺជារឿងធម្មតាណាស់) នាំឱ្យផលិតផលបរាជ័យជាញឹកញាប់នៅពេលដែលផលិតផលទៅដល់អតិថិជន។នេះបានបង្កបញ្ហាដល់សហគ្រាសនាំចេញសារធាតុអាស៊ីត nucleic ភាគច្រើន។
បច្ចេកវិទ្យា Lyophilized សម្រាប់ reagent PCR បានជួយដល់ការដឹកជញ្ជូនភ្នាក់ងាររកឃើញអាស៊ីតនុយក្លេអ៊ីកថ្មី Coronavirus ទូទាំងពិភពលោក
សារធាតុ lyophilized PCR អាចត្រូវបានដឹកជញ្ជូន និងរក្សាទុកនៅសីតុណ្ហភាពបន្ទប់ ដែលមិនត្រឹមតែអាចកាត់បន្ថយថ្លៃដើមដឹកជញ្ជូនប៉ុណ្ណោះទេ ប៉ុន្តែថែមទាំងជៀសវាងបញ្ហាគុណភាពដែលបណ្តាលមកពីដំណើរការដឹកជញ្ជូនផងដែរ។ដូច្នេះ lyophilizing reagent គឺជាមធ្យោបាយដ៏ល្អបំផុតដើម្បីដោះស្រាយបញ្ហានៃការដឹកជញ្ជូននាំចេញ។
Lyophilization ជាប់ពាក់ព័ន្ធនឹងការបង្កកសូលុយស្យុងចូលទៅក្នុងសភាពរឹង ហើយបន្ទាប់មក sublimate និងបំបែកចំហាយទឹកនៅក្រោមលក្ខខណ្ឌខ្វះចន្លោះ។សូលុយស្យុងស្ងួតនៅតែមាននៅក្នុងធុងដែលមានសមាសភាពនិងសកម្មភាពដូចគ្នា។បើប្រៀបធៀបជាមួយសារធាតុរាវធម្មតា សារធាតុរាវរកឃើញអាស៊ីតនុយក្លេអ៊ីក Novel Coronavirus ដែលមានសមាសធាតុ lyophilized ពេញលេញដែលផលិតដោយ Liming Bio មានលក្ខណៈដូចខាងក្រោម៖
ស្ថេរភាពកំដៅខ្លាំង៖វាអាចជាមួយនឹងការព្យាបាលដោយឈរនៅសីតុណ្ហភាព 56 ℃រយៈពេល 60 ថ្ងៃហើយរូបរាងនិងដំណើរការនៃសារធាតុប្រតិកម្មនៅតែមិនមានការផ្លាស់ប្តូរ។
ការផ្ទុកនិងការដឹកជញ្ជូនសីតុណ្ហភាពធម្មតា៖មិនត្រូវការខ្សែសង្វាក់ត្រជាក់ មិនចាំបាច់រក្សាទុកនៅសីតុណ្ហភាពទាបមុនពេលបិទជិត បញ្ចេញទំហំផ្ទុកត្រជាក់ពេញលេញ។
រួចរាល់សម្រាប់ប្រើ៖lyophilizing នៃសមាសភាគទាំងអស់, មិនត្រូវការការកំណត់រចនាសម្ព័ន្ធប្រព័ន្ធ, ជៀសវាងការបាត់បង់នៃសមាសភាគដែលមាន viscosity ខ្ពស់ដូចជាអង់ស៊ីម។
គោលដៅច្រើនក្នុងបំពង់តែមួយ៖គោលដៅនៃការរកឃើញមានគ្របដណ្តប់លើហ្សែនថ្មីនៃមេរោគ ORF1ab, ហ្សែន N, ហ្សែន S ដើម្បីចៀសវាងការចម្លងមេរោគ។ដើម្បីកាត់បន្ថយភាពអវិជ្ជមានមិនពិត ហ្សែន RNase P របស់មនុស្សត្រូវបានប្រើជាការគ្រប់គ្រងផ្ទៃក្នុង ដើម្បីបំពេញតាមតម្រូវការគ្លីនិកសម្រាប់ការត្រួតពិនិត្យគុណភាពគំរូ។